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혈액 내 간섭 물질을 제거하기 위한 전처리 방법

게시자 관리자 | 01 Mar

일반적으로 혈액의 복잡한 구성으로 인해 많은 물질, 특히 고등 동물의 혈장 또는 혈청은 TAL(LAL) 시약과 내독소 사이의 반응에 강한 간섭 효과를 나타냅니다. 따라서 이러한 샘플의 엔도톡신을 테스트할 때 간섭 물질을 제거한 후 테스트해야 합니다.

현재 혈장 내 간섭 물질은 주로 다양한 프로테아제 억제제, 내독소 결합 단백질 및 플라스미노겐 억제제를 포함한다. 비색법의 경우 인자 Xa는 Boc-LEU-Gly-Arg-PNA 펩티드 사슬을 분해할 수 있습니다. 따라서 결정하기 전에 이러한 간섭 물질을 제거할 필요가 있습니다.

혈액 내 간섭 물질을 제거하기 위한 전처리 방법은 다음과 같다.

(1) 희석가열법 : 혈장을 용해수로 3~10배 희석한 후 37~100℃의 물에서 가열한다. 유지 시간은 일반적으로 5~10분입니다.

(2) 클로로포름 추출 방법: 동량의 클로로포름을 플라즈마에 첨가하고 3시간 동안 진동한 다음 상층을 취하여 검출합니다.

(삼) 에테르 처리 방법: 처리를 위해 플라즈마에 에테르를 첨가하고 40℃에서 에테르를 제거하는 단계;

(4) 트리플루오로아세트산 방법: 혈장에 아세트산을 첨가하여 pH 4.0을 조정한 다음 K2HPO4를 사용하여 pH를 7~7.5로 조정합니다.

(5) 계면활성제 처리법 : 희석가열법과 같이 희석수만 계면활성제로 변화시킨다.

(6) 겔 여과;

(7) 알칼리 처리 방법: 혈장을 0.2NNaOH 37℃에서 10분간 유지한 후 HCl로 중화하고;

(8) 과염소산법(PCA) 또는 신과염소산법(New PCA);

(9) 비드 방법: 내독소를 흡수하는 특수 수지를 혈장에 넣고 꺼낸 다음 LAL 시약을 첨가하여 반응시킵니다.

이들 방법 중 일반적으로 사용되는 방법으로는 클로로포름 추출법, 희석가열법, 과염소산(PCA)법, 신과염소산(New PCA)법 등이 있다. 처음 두 가지 방법은 내 독소 회수율, 위양성 및 기타 문제로 인해 결정 중에 논의가 필요합니다. PCA법(New PCA법)은 첨가된 엔도톡신의 회수율이 좋아 현재 일본에서는 전임상 치료에 주로 사용되고 있다.

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